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登革熱抗原NS1早期檢測試劑

簡要描述:

登革熱抗原NS1早期檢測試劑
登革熱病毒是黃病毒屬,主要分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)。世界上一半以上的人口居住于具有登革熱潛在傳播風險的地區(qū),登革熱是導致人類發(fā)病和死亡嚴峻的蟲媒病毒疾病 1。登革熱病毒有 4 種不同但抗原相關的血清型,通過蚊(主要是埃及伊蚊、白紋伊蚊傳播和波利尼西亞斑蚊)傳播。

更新時間:2025-01-03

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登革熱抗原NS1早期檢測試劑

 

Panbio Dengue Early ELISA

產(chǎn)品目錄號 01PE40

 

預期用途

Panbio Dengue EARLY ELISA 是一種登革熱NS1 抗原捕獲 ELISA。 用于定性檢測血清中的 NS1 抗原, 輔助臨床實驗室診斷出現(xiàn)登革熱臨床癥狀的患者。 Panbio Dengue EARLY ELISA 應該與其它登革熱血清診斷法聯(lián)用。

 

概述

登革熱病毒是黃病毒屬,主要分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)。世界上一半以上的人口居住于具有登革熱潛在傳播風險的地區(qū),登革熱是導致人類發(fā)病和死亡嚴峻的蟲媒病毒疾病 1。登革熱病毒有 4 種不同但抗原相關的血清型,通過蚊主要是埃及伊蚊、白紋伊蚊傳播和波利尼西亞斑蚊)傳播。

 

登革熱病毒感染的臨床表現(xiàn)各不相同,從亞臨床表現(xiàn)到致命。依據(jù)嚴重程度,該疾病被分為以下等級:非特異性發(fā)熱疾病,典型登革熱,登革出血熱DHF)(1 級和 2 ,和登革休克綜合征DSS)(3 4 1。典型登革熱的特征是突然發(fā)熱并至少伴隨以下 2 種癥狀:頭痛、眼眶后疼痛、肌痛、關節(jié)痛、皮疹、出血表現(xiàn)或白血球減少癥 2。雙相發(fā)熱病程常見失眠和厭食,失去味覺或口苦。DHF DSS 是嚴重的潛在致命性并發(fā)癥,通常與感染第二種血清型有關 3。

登革熱的早期診斷允許進行早期的支持療法和監(jiān)控。這降低了 DHF DDS 等并發(fā)癥發(fā)生的風險,尤其是在登革熱流行的國家 4

通過ELISA 檢測登革熱NS1 抗原是一種非常重要的方法,因為它能夠在血清轉化之前進行感染檢測。 從發(fā)病后的第 1 天直到第 9 天都能在血清中檢測到NS1 抗原 5,6,7見圖示。這區(qū)別于 IgM 抗體,因為 IgM 抗體直到發(fā)病后 3-5 天后才檢測得到。繼發(fā)性登革熱病毒感染的特征是高 IgG , 水平且其峰值檢測窗口是在發(fā)病后的 6-15 天。這可能伴隨著 IgM 水平升高 10,11。Panbio Dengue IgG Capture ELISA 用于檢測登革熱感染的 IgG 抗體水平相對于閾值特異性升高。該試驗不用于檢測既往感染引起的低水平 IgG 抗體,這種情況通常見于地方性流行區(qū)的較多人群。為了為準確地從發(fā)病后的不同階段診斷登革熱患者,應該使用Panbio Dengue EARLY ELISA (01PE40),Panbio Dengue lgM Capture ELISA (01PE20) Panbio Dengue lgG Capture ELISA (01PE10)三者相結合的方法。

檢測原理

血清中存在的登革熱 NS1 抗原,與微孔板上聚苯乙烯表面附著的抗 NS1 抗體相結合。洗去剩余的血清并添加 HRP 標記的抗 NS1 單克隆抗體。在培養(yǎng)完成后清洗微孔,再添加無色的底物系統(tǒng) - 四甲基聯(lián)苯胺/ *TMB 顯色液。底物被酶水解后,TMB 顯色液變藍。用酸終止反應后,TMB 變黃。顯色表示測試樣本中存在登革熱NS1 抗原。

 

提供的材料

  • NS1 抗體包被微孔板12x8 孔)- 微孔板由抗 NS1 抗體包被。即用型。未使用的微孔應該立即重新密封并儲存于干燥環(huán)境中。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。
  • HRP 標記抗 NS1 單克隆抗體1 瓶,15mL橙色。 辣根過氧化物酶HRP標記抗 NS1 單克隆抗體,含防腐劑0.1% Proclin™。即用型。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。
  • 清洗緩沖液20 倍) - 1 瓶,60mL 20 倍濃縮磷酸鹽緩沖鹽水pH 7.2 – 7.6),含吐溫 20 和防腐0.1% Proclin™。低溫可能結晶。若去除結晶,可在 37℃孵育液體至澄清?;旌暇鶆?。用 19 體積的蒸餾水稀釋 1 體積的清洗緩沖液。稀釋后的緩沖液可在 2-25℃儲存一周。
  • 樣本稀釋劑1 瓶,22mL棕色。即用型。Tris 緩沖生理鹽水pH 7.2 – 7.6,含防腐劑0.1% Proclin™和添加劑。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。
  • TMB 顯色液TMB - 1 瓶,15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基聯(lián)苯胺和*的混合物,存放于枸櫞酸鹽緩沖液中pH 3.5 – 3.8。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。
  • 陽性質控品1 瓶,紫色瓶蓋,1.2mL 重組抗原(0.1%Proclin™0.005%硫酸慶大霉素。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。
  • 校準品2 瓶,橙色瓶蓋,1.5mL 重組抗原(0.1%Proclin™0.005%硫酸慶大霉素。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

 

8. 陰性質控品1 瓶,白色瓶蓋,1.2mL 人血清0.1%疊氮0.005%硫酸慶大霉素)。有效期內儲存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

  • 終止液 – 1 瓶,紅色瓶蓋,15mL。即用型。1M 磷酸。有效期內儲存于 2-25℃可保持穩(wěn)定。

 

Proclin™ 300 Rohm Haas 公司的注冊商標。

 

需要但未提供的材料

1. 精確、可調節(jié)的微量移液器,含一次性吸液頭5-1000μL 容積

2. 去離子水

3. 標板清洗系統(tǒng)

4. 酶標儀,含 450nm 濾波器

5. 計時器

6. 刻度量筒

7. 燒瓶

8. 用于稀釋的試管或微滴定板

 

注意事項

用于體外診斷

  • 在制備質控品的過程中使用的所有人源性材料已經(jīng)過人類免疫缺陷病毒 1 2HIV 1 2抗體、丙HCV和乙肝表面抗原的檢測,結果為陰性。但是,任何測試方法都不能*確信,且所有人源性質控品和抗原都應按照潛在傳染性材料處理。疾病控制和預防中心以及美國國立衛(wèi)生研究院建議將潛在傳染原按照生物安全二級 12 處理。
  • 該測試只能使用血清執(zhí)行。尚未建立使用全血、血漿或其它標本基質的方法。

3. 不可使用黃疸或脂血癥血清,以及出現(xiàn)溶血或微生物生長的血清。

4. 不可加熱,否則血清將失去活性。

5. 在開始檢測前所有試劑必須平衡至室溫20-25℃)。檢測受溫度變化的影響。微孔板在達到室溫

20-25℃)之前不可從密封袋中取出。

6. 直接用干凈的吸液頭從試劑瓶中吸出試劑。轉移試劑可能導致污染。

7. 未使用的微孔應該立即重新密封并儲存于干燥環(huán)境中。否則將產(chǎn)生錯誤結果。

8. 底物系統(tǒng):

(a) 由于 TMB 易受金屬離子的污染,所以底物系統(tǒng)不能與金屬表面接觸。

(b) 避免長時間陽光直射。

(c) 有些清潔劑可干擾 TMB 的性能。


TMB 可能呈現(xiàn)淡藍色,這不影響底物的活性或測定結果。

9. 某些試劑盒組成包含疊氮,疊氮可能與鉛或銅管反應形成極易爆炸的金屬疊氮話合物。通過管道裝置處理這些試劑時,請用大量清水沖洗以避免疊氮化物在排水管內累積。

10. 疊氮還抑制酶標物的活性。在添加酶標物時必須使用干凈的吸液頭,避免攜帶其它試劑的疊氮話鈉。

 

登革熱抗原NS1早期檢測試劑

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